3T3-L1細胞，小鼠胚胎成纖維細胞， 3T3-L1細胞

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庫存狀態：現貨

細胞規格：株

質控標準：無支原體、無污染、符合標準

運輸方式：新鮮運輸和凍存管運輸

貨期：新鮮運輸需要1-2周，凍存管運輸的需要2-3天

專線電話：021-69125237/18916413500

 3T3-L1細胞，小鼠胚胎成纖維細胞， 3T3-L1細胞，質粒的相關知識：
一.如何閱讀質粒圖譜
**步：首先看 Ori 的位置，了解質粒的類型（原核/真核/穿梭質粒）。
**步：再看篩選標記，如抗性，決定使用什么篩選標記。
--Ampr   水解β-內酰胺環，解除氨芐的毒性；
--tetr   可以阻止四環素進入細胞；
--camr   生成氯霉素羥乙?；苌?，使之失去毒性；
--neor(kanr)氨基糖苷磷酸轉移酶 使G418（長那霉素衍生物）失活；
--hygr   使潮霉素β失活。
第三步：看多克隆位點（MCS）。它具有多個限制酶的單一切點，便于外源基因的插入。如果在這些位點外有外源基因的插入，會導致某種標志基因的失活，從而便于篩選。MCS決定了能不能放置目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源DNA插入片段大小。質粒一般只能容納小于10Kb的外源DNA片段。一般來說，外源DNA片段越長，越難插入，越不穩定，轉化效率越低。
第五步：是否含有表達系統元件，即啟動子－核糖體結合位點－克隆位點－轉錄終止信號，這是用來區別克隆載體與表達載體。在克隆載體中加入一些與表達調控有關的元件即成為表達載體。選用哪種載體，要以實驗目的為依據。
二.如何選擇載體
把目的基因通過基因工程手段送到生物細胞（受體細胞），需要運載工具（交通工具）攜帶外源基因進入受體細胞，這種運載工具就叫做載體（vector）?；蚬こ趟玫膙ector實際上是用來攜帶目的基因片段進入受體細胞的 DNA。
選擇載體主要依據構建的目的，同時要考慮載體中應有合適的限制酶切位點。如果構建的目的是要表達一個特定的基因，則要選擇合適的表達載體。
 3T3-L1細胞，小鼠胚胎成纖維細胞， 3T3-L1細胞載體選擇主要考慮下述3點：
1. 構建DNA重組體的目的：克隆載體/表達載體。
2. 載體的類型：
克隆載體的克隆能力：根據克隆片段大?。ù筮x大，小選?。?。如<10kb選質粒。
表達載體：根據受體細胞類型：原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳類細胞表達載體。
原核表達載體要選擇合適的啟動子及相應的受體菌；表達真核蛋白時需注意閱讀框錯位問題；表達天然蛋白和融合蛋白所需載體亦有區別。
3. 選用質粒做載體的4點要求：
（1）選分子量小的質粒，即小載體（1~1.5 kb）：不易損壞，在**里面拷貝數也多（也有大載體）；
（2）一般使用松弛型質粒在**里擴增不受約束，一般10個以上的拷貝，而嚴謹型質粒<10個。
（3）必需具備一個以上的酶切位點，有選擇的余地；
（4）必需有易檢測的標記，多是***的抗性基因。
無論選用哪種載體，首先都要獲得載體分子，然后采用適當的限制酶將載體DNA進行切割，獲得載體片段，以便于與目的基因片段進行連接。

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透析胎牛血清Dialyzed FBS S-FBS-US-065 USA 500ML 5800

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