b.End3細胞株 b.End3細胞形態?細胞/細胞培養條件/傳代方法/凍存條件/支原體檢測/STR/特征特性/形態特性/生長特性/
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反復貼壁法:根據腫瘤細胞比成纖維細胞貼壁速度慢的特點,并結合使用不加血清的營養液,把含有兩類細胞的細胞懸液反復貼壁,使兩類細胞相互分離,操作方法與傳代相同。
待細胞生長達一定數量后,倒出舊培養液,用胰酶消化后,Hanks 沖洗2次,加入不含血清的培養液,吹打制成細胞懸液;
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酶消化法:在上述的碎組織塊中加入0.25%胰蛋白酶或(2000u/ml膠原酶)在37℃水浴中消化30分鐘(或更長一些),去除消化液,用洗液洗3次,培養液洗1次后,用完全培養基懸浮,并用吸管吹打分散制成細胞懸液,計數。以5×108?~10×108?/L細胞濃度,在含有10%小牛血清的RPMI1640(或Eagle?MEM或DMEM)中37℃?5%?CO2下分瓶(或皿)培養。
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假細胞難分辨,郵寄的細胞狀態差,細胞污染嚴重,細胞生長速度太慢等這些都是廣大科研工作者的煩惱,如何購買一株放心的細胞,使自己的實驗順利進行很重要。
鉭網培養法:在一張面積約為1cm2?的鉭網上放入上述剪碎的一塊或幾塊腫瘤組織塊(1~2mm3?大小),用鑷子輕壓,使其粘于網上,再把鉭網放入培養皿中,使網下的組織塊與皿壁緊緊接觸,于37℃?5%?CO2下培養,每隔2~3天換液一次,5天后可見有上皮細胞從網上移出,并能在相當于腫瘤組織部位形成純凈的單層上皮細胞。?
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b.End3細胞株 b.End3細胞形態??消化排除法:此法曾用于乳癌細胞的培養,具體程序是:先是用0.5%胰蛋白酶和0.02%EDTA(1:1)混合液漂洗培養細胞一次,然后再換成新的混合液繼續消化,并在倒置顯微鏡下窺視和不時搖動培養瓶,到半數細胞脫落下來后,便立即停止消化;
把消化液吸入離心管中,離心去上清,吸入另瓶中,加培養液置溫箱中培養;
向原瓶內也補加新的培養液繼續培養。用此法處理后,成纖維細胞比腫瘤細胞易先脫落。經過幾次反復處理,可能把成纖維細胞除凈。
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